Отправить свою хорошую работу в базу знаний просто. Используйте форму, расположенную ниже

Студенты, аспиранты, молодые ученые, использующие базу знаний в своей учебе и работе, будут вам очень благодарны.

Размещено на http://www.allbest.ru/

Микрофлора кормов и пищевых продуктов

Выполнил студент 2 курса

Тутунарь Денис

Микрофлора кормов

Эпифитная микрофлора . На поверхностных частях растений постоянно присутствует разнообразная микрофлора, называемая эпифитной. На стеблях, листьях, цветах, плодах наиболее часто встречаются следующие неспоровые виды микроорганизмов: Bact, herbicola составляет 40% всей эпифитной микрофлоры, Ps. fluorescens - 40%, молочнокислые бактерии - 10 %, им подобные - 2 %, дрожжи, плесневые грибы, целлюлозные, маслянокислые, термофильные бактерии - 8 %.

После скашивания и потери сопротивляемости растений, а также в силу механического повреждения их тканей эпифитная и прежде всего гнилостная микрофлора, интенсивно размножаясь, проникает в толщу растительных тканей и вызывает их разложение. Именно поэтому продукцию растениеводства (зерно, грубые и сочные корма) от разрушительного действия эпифитной микрофлоры предохраняют различными методами консервирования.

Известно, что в растениях имеется связанная вода, входящая в состав их химических веществ и свободная -- капельно-жидкая. Микроорганизмы могут размножаться в растительной массе только при наличии в ней свободной воды. Одним из наиболее распространенных и доступных методов удаления из продуктов растениеводства свободной воды и, следовательно, их консервирования является высушивание и силосование.

Сушка зерна и сена предусматривает удаление из них свободной воды. Поэтому микроорганизмы на них размножаться не могут до тех пор, пока эти продукты будут сухими.

В свежескошенной неперестоявшей траве воды содержится 70 - 80 %, в высушенном сене только 12--16 %, оставшаяся влага находится в связанном состоянии с органическими веществами и микроорганизмами не используется. Во время сушки сена теряется около 10 % органических веществ, главным образом при разложении белков и Сахаров. Особенно большие потери питательных веществ, витаминов и минеральных соединений происходят в высушенном сене, находящемся в прокосах (валках), когда часто идут дожди. Дождевая дистиллированная вода вымывает их до 50 %. Значительные потери сухого вещества происходят в зерне при его самосогревании. Этот процесс обусловлен термогенезом, то есть созданием тепла микроорганизмами. Возникает он потому, что термофильные бактерии используют для своей жизни только 5 - 10 % энергии потребляемых ими питательных веществ, а остальная выделяется в окружающую их среду - зерно, сено.

Силосование кормов. При выращивании кормовых культур (кукурузы, сорго и др.) с одного гектара удается получить в зеленой массе значительно больше кормовых единиц, чем в зерне. По крахмальному эквиваленту питательность зеленой массы при сушке может снизиться до 50 %, а при силосовании только до 20 %. При силосовании не теряются мелкие листья растений, обладающие высокой питательностью, а при высушивании они опадают. Закладку силоса можно производить и при переменной погоде. Хороший силос является сочным, витаминным, молокогонным кормом.

Сущность силосования состоит в том, что в заложенной в емкости измельченной зеленой массе интенсивно размножаются молочнокислые микробы, разлагающие сахара с образованием молочной кислоты, накапливающейся до 1,5--2,5 % к массе силоса. Одновременно размножаются уксуснокислые бактерии, превращающие спирт и другие углеводы в уксусную кислоту; ее накапливается 0,4--0,6 % к массе силоса. Молочная и уксусная кислоты являются сильным ядом для гнилостных микробов, поэтому размножение их прекращается.

Силос сохраняется в хорошем состоянии до трех лет, пока в нем содержится не менее 2 % молочной и уксусной кислот, а рН составляет 4--4,2. Если размножение молочнокислых и уксусных бактерий ослабевает, то концентрация кислот снижается. В это время одновременно начинают размножаться дрожжи, плесени, маслянокислые и гнилостные бактерии и силос портится. Таким образом, получение хорошего силоса зависит прежде всего от наличия в зеленой массе сахароз и интенсивности развития молочнокислых бактерий.

В процессе созревания силоса различают три микробиологические фазы, характеризующиеся специфическим видовым составом микрофлоры.

Первая фаза характеризуется размножением смешанной микрофлоры с некоторым преобладанием гнилостных аэробных неспоровых бактерий -- кишечной палочки, псевдомонас, молочнокислых микробов, дрожжей. Спороносные гнилостные и маслянокислые бактерии размножаются медленно и не преобладают над молочнокислыми. Основной средой для развития смешанной микрофлоры в этой стадии является растительный сок, выделяющийся из тканей растений и заполняющий пространство между измельченной растительной массой. Это способствует созданию анаэробных условий в силосе, что угнетает развитие гнилостных бактерий и благоприятствует размножению молочнокислых микробов. Первая фаза при плотной укладке силоса, то есть в анаэробных условиях, продолжается всего 1--3 дня, при рыхлой укладке в аэробных условиях она более продолжительна и длится 1--2 недели. За это время силос разогревается благодаря интенсивным аэробным микробиологическим процессам. Вторая фаза созревания силоса характеризуется бурным размножением молочнокислых микробов, причем вначале развиваются преимущественно кокковые формы, которые затем сменяются молочнокислыми бактериями.

Благодаря накоплению молочной кислоты прекращается развитие всех гнилостных и маслянокислых микроорганизмов, при этом вегетативные их формы погибают, остаются лишь спороносные (в форме спор). При полном соблюдении технологии закладки силоса в этой фазе размножаются гомоферментативные молочнокислые бактерии, образующие з Сахаров только молочную кислоту. При нарушении технологии закладки силоса, когда в нем. содержится воздух, развивается микрофлора гетероферментативного брожения, в результате чего образуются нежелательные летучие кислоты -- масляная, уксусная и др. Длительность второй фазы -- от двух недель до трех месяцев.

Третья фаза характеризуется постепенным отмиранием в силосе молочнокислых микробов из-за высокой концентрации молочной кислоты (2,5 %). В это время созревание силоса завершается, условным показателем пригодности его к скармливанию считается кислотность силосной массы, снижающаяся до рН 4,2 - 4,5 (рис. 37). В аэробных условиях начинают размножаться плесени и дрожжи, которые расщепляют молочную кислоту, этим пользуются маслянокислые и гнилостные бактерии, прорастающие из спор, в результате силос плесневеет и загнивает.

Пороки силоса микробного происхождения . При несоблюдении надлежащих условий закладки и хранения силоса в нем возникают определенные пороки.

Гниение силоса, сопровождающееся значительным самосогреванием, отмечают при рыхлой его укладке и недостаточном уплотнении. Бурному развитию гнилостных и термофильных микробов способствует находящийся в силосе воздух. В результате разложения белка силос приобретает гнилостный, аммиачный запах и становится непригодным к скармливанию. Гниение силоса происходит в первой микробиологической фазе, когда задерживается развитие молочнокислых микробов и накопление молочной кислоты, подавляющей гнилостных бактерий. Чтобы прекратить развитие последних, необходимо рН в силосе снизить до 4,2--4,5. Гниение силоса вызывают Er. herbicola, E. coli, Ps. aerogenes. P. vulgaris, B. subtilis, Ps. fluorescens, а также плесневые грибы.

Прогоркание силоса обусловлено накоплением в нем масляной кислоты, обладающей резким горьким вкусом и неприятным запахом. В хорошем силосе масляная кислота отсутствует, в силосе среднего качества ее обнаруживают до 0,2%, а в непригодном к скармливанию -- до I %.

Возбудители маслянокислого брожения способны превращать молочную в масляную кислоту, а также вызывать гнилостный распад белков, что усугубляет их отрицательное действие на качество силоса. Маслянокислое брожение проявляется при медленном развитии молочнокислых бактерий и недостаточном накоплении молочной кислоты, при рН выше 4,7. При быстром же накоплении молочной кислоты в силосе до 2 % и рН 4--4,2 маслянокислого брожения не происходит.

Основные возбудители маслянокислого брожения в силосе: Ps. fluo-rescens, Cl. pasteurianum, Cl. felsineum.

Перекисание силоса наблюдается при энергичном размножении в нем уксуснокислых, а также гнилостных бактерий, способных продуцировать уксусную кислоту. Уксуснокислые бактерии особенно интенсивно размножаются при наличии в силосе этилового спирта, накапливаемого дрожжами спиртового брожения. Дрожжи и уксуснокислые бактерии -- аэробы, поэтому значительное содержание уксусной кислоты в силосе и, следовательно, его перекисание отмечают при наличии в силосе воздуха.

Плесневение силоса происходит при наличии в силосе воздуха, что благоприятствует интенсивному развитию плесеней и дрожжей. Эти микроорганизмы всегда обнаруживают на растениях, поэтому при благоприятных условиях начинается их быстрое размножение.

Ризосферная и эпифитная микрофлора могут играть и негативную роль. Корнеплоды нередко поражают гнилью (черный - Alternaria radicina, серый -Botrutus cinirea, картофельный - Phitophtora infenstans). К порче силоса приводит чрезмерная деятельность возбудителей маслянокислого брожения. На вегетирующих растениях размножаются спорынья (claviceps purpurae), вызывающая заболевание эрготизм. Грибы вызывают токсикозы. Возбудитель ботулизма (Cl. вotulinum), попадая в корм с почвой и фикалиями, вызывает тяжелый токсикоз, нередко с летальным исходом. Многие грибы (Aspergillus, Penicillum, Mucor, Fusarium, Stachybotrus) заселяют корма, размножаясь при благоприятных условиях, и вызывают у животных острые или хронические токсикозы, чаще сопровождающиеся неспецифическими симптомами.

Микробиологические препараты используются в рационах животных и птиц. Ферменты улучшают усвоение корма. На микробиологической основе получают витамины, аминокислоты. Возможно использование бактериального белка. Кормовые дрожжи представляют собой хороший белково-витаминный корм. В дрожжах содержится легкопереваримый белок, провитамин D (зргостерин), а также витамины А, В, Е. Размножаются дрожжи очень быстро, поэтому в промышленных условиях удается получать большое количество дрожжевой массы при культивировании их на патоке или осахаренной клетчатке. В настоящее время в нашей стране сухие кормовые дрожжи готовят в большом коли честве. Для их изготовления используется культура кормовых дрожжей.

Микрофлора пищевых продуктов при холодильном хранении

Микрофлора сырых пищевых продуктов растительного и животного происхождения очень разнообразна. К микроорганизмам, составляющим микрофлору продуктов относятся бактерии, дрожжи, плесени, простейшие животные (протоза) и некоторые водоросли. Микроорганизмы в природе широко распространены благодаря лёгкой приспосабливаемости к теплу, холоду, недостатку влаги, а так же благодаря их высокой стойкости и быстрому размножению. силос микробный микрофлора плесень

Развитие микробиологических процессов в пищевых продуктах может привести к снижению пищевой ценности и резко ухудшить органолептические показатели пищевых продуктов, вызвать образование вредных для продуктов веществ. Поэтому одна из задач пищевой промышленности - ограничение вредного воздействия микроорганизмов на продукты. Однако существуют определенные микроорганизмы, присутствие которых в пищевых продуктах придает им новые вкусовые свойства. Метод замещения нежелательной микрофлоры на микрофлору c требуемыми свойствами используется при производстве кефира, простокваши, ацидофилина, сыров, квашеной капусты и др.

Для развития микроорганизмов необходимо наличие воды в доступной для них форме. Потребность микроорганизмов в воде может быть выражена количественно в виде активности воды, которая зависит от концентрации растворенных веществ и степени их диссоциации.

Развитие микрофлоры при понижении температуры резко тормозится, причем тем больше, чем ближе температура к точке замерзания тканевой жидкости продукта. Эффект влияния понижения температуры на микробную клетку обусловлен нарушением сложной взаимосвязи метаболических реакций в результате различного уровня изменений их скоростей и повреждением молекулярного механизма активного переноса растворимых веществ через клеточную мембрану. Наряду с этим происходит изменение и качественного состава микроорганизмов. Некоторые группы их размножаются и при низких температурах, вызывая заражение травмированных при уборке и транспортировке плодов и овощей. Затем инфекция распространяется и на здоровые, неповрежденные плоды и овощи.

По отношению к температуре все микроорганизмы делят на три группы: ТЕРМОФИЛЫ (55-75 о С); МЕЗОФИЛЫ (25-37 о С); ПСИХРОФИЛЫ (0-15 о С).

Для холодильной технологии важное значение имеют психрофильные микроорганизмы в пищевых продуктах. Они содержатся в почве, воде, воздухе, обладая способностью обсеменять технологическое оборудование, инструменты, тару, непосредственно пищевые продукты. Они активно размножаются на продуктах с небольшой кислотностью - мясе, рыбе, молоке и овощах.

Замораживание пищевых продуктов сопровождается понижением количества микроорганизмов и их активности. В начальный период замораживания, когда основная часть воды превращается в лёд, происходит резкое снижение числа клеток микроорганизмов (зона А). Затем следует замедление размножения микроорганизмов (зона В). Затем процесс стабилизируется, и остаётся некоторое количество устойчивых клеток микроорганизмов (зона С).

Гибель микроорганизмов при замораживании с наибольшей интенсивностью происходит при температуре от -5 до -10 о С. Ряд дрожжей и плесневых грибов способны к процессам жизнедеятельности вплоть до температуры -10 - -12 о С.

Размещено на Allbest.ru

...

Подобные документы

Обзор способов размножения бактерий, актиномицетов, дрожжей, плесневых грибов. Влияние лучистой энергии и антисептиков на развитие микроорганизмов. Роль пищевых продуктов в возникновении пищевых заболеваний, источники инфицирования, меры профилактики.

контрольная работа , добавлен 24.01.2012


Основные группы микроорганизмов, используемых в пищевой промышленности: бактерии, дрожжи и плесени, их характеристика. Спиртовое брожение, разложение сахара на спирт и углекислый газ. Процесс молочнокислого, пропионовокислого и маслянокислого брожения.

курсовая работа , добавлен 07.12.2013


Описание структуры воды пресных водоемов и донных иловых отложений. Характеристика почвы как среды обитания микроорганизмов. Исследование влияния вида и возраста растений на ризосферную микрофлору. Рассмотрение микробного населения почв разных типов.

курсовая работа , добавлен 01.04.2012


Основные свойства молока и причины возникновения патогенной микрофлоры. Сущность биохимических процессов брожения и гниения. Фазы изменения микрофлоры парного молока. Характеристика кисломолочных продуктов, особенности их использования человеком.

курсовая работа , добавлен 12.04.2012


Типичные процессы брожения. Краткая характеристика микроорганизмов-возбудителей. Микрофлора плодов и овощей, зерномучных продуктов, стерилизация баночных консервов. Основные виды микробиологической порчи. Понятие и способы дезинфекции. Санитарный надзор.

контрольная работа , добавлен 26.10.2010


Функции микроорганизмов: разложение растительных и животных остатков, использование в технологиях производства пищевых продуктов и биологически активных соединениях. Виды анаэробных процессов: спиртового, молочнокислого, пропионового и масляного брожения.

реферат , добавлен 20.01.2011


История развития микробиологии, задачи и связь с другими науками. Роль микробов в народном хозяйстве и патологии животных. Изучение плесеней и дрожжей. Микрофлора животных, почвы и кормов. Понятие и значение антибиотиков, стерилизации и пастеризации.

шпаргалка , добавлен 04.05.2014


Общая информация о пропионовокислых бактериях. Основные продукты пропионовокислого брожения, химизм, особенности. Зависимость соотношения продуктов брожения от степени окисленности источника углерода. Применение пропионовокислых бактерий в промышленности.

реферат , добавлен 01.06.2010


Исследование основных типов микроорганизмов: бактерий, грибов и водорослей. Анализ условий, необходимых для роста микроорганизмов. Механизм образования микробиологических отложений. Изучение методов микробиологического тестирования и приборов мониторинга.

презентация , добавлен 23.10.2013


Свойства прокариотных микроорганизмов. Методы определения подвижности у бактерий. Участие микроорганизмов в круговороте азота в природе. Нормальная и анормальная микрофлора молока. Культивирование анаэробных микроорганизмов в условиях лаборатории.

ГОСТ Р 51426-99
(ИСО 6887-83)

Группа С19

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

МИКРОБИОЛОГИЯ. КОРМА, КОМБИКОРМА, КОМБИКОРМОВОЕ СЫРЬЕ

Общее руководство по приготовлению разведений для микробиологических исследований

Microbiology. Feedstuffs, compound feeds, feed raw materials. General guidance for the preparation of dilutions for microbiological examination

Текст Сравнения ГОСТ Р 51426-2016 с ГОСТ Р 51426-99 см. по ссылке .
- Примечание изготовителя базы данных.
____________________________________________________________________

ОКС 65.120
ОКСТУ 9209, 9709

Дата введения 2001-01-01

Предисловие

1 РАЗРАБОТАН творческим коллективом с участием представителей Технического комитета по стандартизации ТК 4 "Комбикорма, белково-витаминные добавки, премиксы"

ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 4 "Комбикорма, белково-витаминные добавки, премиксы"

2 ПРИНЯТ И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Госстандарта России от 22 декабря 1999 г. N 581-ст

3 Настоящий стандарт представляет собой аутентичный текст международного стандарта ИСО 6887-83* "Микробиология. Общее руководство по приготовлению разведений для микробиологических исследований", за исключением наименования, 1, 2, 7
________________
* Доступ к международным и зарубежным документам, упомянутым здесь и далее по тексту, можно получить перейдя по ссылке на сайт http://shop.cntd.ru . - Примечание изготовителя базы данных.

4 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

5 ПЕРЕИЗДАНИЕ

1 Область применения

1 Область применения

Настоящий стандарт распространяется на корма, комбикорма, комбикормовое сырье и представляет собой общее руководство по приготовлению разведений для выявления наличия (отсутствия) или определения количества аэробных микроорганизмов (в настоящее время руководство должно использоваться в сочетании с методами, описанными в "Правилах бактериологического исследования кормов").

Обязательные требования к порядку проведения разведений изложены в разделе 9.

2 Нормативные ссылки

ГОСТ 13496.0-80 * Комбикорма, сырье. Методы отбора проб
_______________
* Действует до введения в действие ГОСТ Р, разработанного на основе ИСО 6497 .


ГОСТ Р 51419-99 (ИСО 6498-98) Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Подготовка испытуемых проб

3 Определения

В настоящем стандарте применяют следующие термины с соответствующими определениями:

исходная суспензия (первичное разведение): Суспензия, раствор или эмульсия, полученные после того, как взвешенное или измеренное количество исследуемого продукта было смешано, если это необходимо, с использованием смесителя и соблюдением соответствующих предосторожностей (см. примечание к 9) с девятикратным количеством жидкости для разведения (разбавитель см. 5) так, чтобы крупные частицы, если они есть, могли осесть.

Примечание - В некоторых случаях, в особенности для продуктов, у которых исходная 1+9 суспензия слишком вязкая или слишком густая, необходимо прибавить больше разбавителя. Это следует учитывать в последующих действиях и при представлении результатов;


дальнейшие десятикратные разведения: Суспензии или растворы, полученные путем смешивания определенного объема исходной суспензии с девятикратным объемом разбавителя и повторения этой процедуры до тех пор, пока не будет получена серия десятикратных разведений, пригодных для инокуляции культуральной среды;

специальный стандарт: Стандарт или официальное руководство, описывающие исследование конкретного продукта (или группы продуктов) на идентификацию или количественный подсчет определенного микроорганизма (или группы микроорганизмов) и описывающие особенности отбора и приготовления испытуемых проб.

4 Сущность метода

Сущность метода заключается в приготовлении исходной суспензии с равномерным, насколько это возможно для испытуемой пробы, распределением микроорганизмов. При необходимости, для того, чтобы снизить количество микроорганизмов на единицу объема и сделать возможным после инкубации наблюдение за их ростом или подсчет колоний, готовят десятикратные разведения.

Приемлемое количество микроорганизмов обычно составляет:

- для наиболее вероятного метода подсчета с использованием трех пробирок: 1 микроорганизм в 10 см самого высокого десятикратного разведения;

- для метода подсчета колоний: от 30 до 300 колоний (для некоторых групп, например, колиформ от 15 до 150 колоний).

5 Разбавитель

5.1 Чтобы добиться воспроизводимости результатов, для приготовления разбавителя следует использовать обезвоженные основные компоненты или обезвоженный полноценный препарат.

Следует строго соблюдать инструкции изготовителя.

Все реактивы должны быть квалификации х.ч. или ч.д.а.

Используемая вода должна быть дистиллированной в стеклянном аппарате или деионизированной.

5.2 Состав

Если нет неопровержимых доказательств (например, авторитетных данных или сравнительных опытов), что другие разбавители более приемлемы для данных продуктов, то следует использовать разбавитель следующего состава: 1,0 г пептона, 8,5 г хлористого натрия, 1 дм воды.

5.3 Приготовление

Компоненты растворяют в воде, если это необходимо, с подогревом.

рН разбавителя после стерилизации должен быть равен 7,0 при 25°С.

5.4 Распределение разбавителя

Разбавитель помещают в пробирки, колбы или флаконы соответствующей вместимости в таком количестве, чтобы после стерилизации каждая из них содержала 9 см разбавителя или объем, кратный 9 см (для десятикратных разведений), или 90 см разбавителя, или объем, кратный 90 см (для исходной суспензии). В случае нежидких продуктов см. 9.1.2. Закрывают пробирки, колбы или флаконы пробками.

Пробирки, колбы или флаконы с разбавителем стерилизуют в автоклаве при (121±1)°С в течение 20 мин.

Если разбавитель не используют сразу, его следует хранить в темноте при температуре от 0 до 5°С не более одного месяца в условиях, не допускающих никаких изменений в его объеме или составе.

Примечание - При подсчете нескольких групп микроорганизмов, нуждающихся в различных культуральных средах, необходимо распределить все разведения (или некоторые из них) в количествах, превышающих 9 см. Вместимость пробирок, колб или флаконов должна быть соответственно указана.

6 Оборудование

Для проведения испытаний применяют обычное микробиологическое оборудование.

6.1 Прибор для сухой или влажной стерилизации (печь или автоклав, работающий отдельно или как часть прибора для приготовления и распределения сред).

Прибор, который будет входить в контакт с разбавителем, пробой или разведениями, кроме оборудования, которое поставляют стерильным (пластиковые чашки, пластиковые пипетки и т.д.), следует стерилизовать по одному из следующих методов:

- путем выдерживания в печи при 170-175°С в течение 1 ч;

- путем выдерживания в автоклаве при (121±1)°С в течение 20 мин.

6.2 Оборудование для встряхивания (для нежидких продуктов см. 9.1.2).

Допускается использовать один из следующих приборов:

- вращательный встряхиватель, устойчивый к условиям стерилизации, работающий частотой вращения от 8000 до 45000 об/мин со стеклянными или металлическими резервуарами, снабженными крышечками;

- встряхиватель перистальтического типа (стомахер) со стерильными пластиковыми емкостями.

Примечание - Резервуары или пластиковые емкости должны быть достаточной вместимости, позволяющей пробе эффективно перемешиваться с достаточным количеством разбавителя. Как правило, вместимость контейнера должна в два раза превышать объем пробы плюс разбавитель.

6.3 Смеситель, способный перемешивать 1 или 2 см пробы (в случае жидких продуктов) или ее более высокое разведение в пробирке соответствующей вместимости с 9 или 18 см разбавителя для получения гомогенной суспензии, работающий по принципу эксцентрического вращения содержимого пробирки (смеситель Вортекса).

6.4 Колбы или флаконы вместимостью, достаточной для того, чтобы поместить 90 см разбавителя, используемого для приготовления исходной суспензии, или количество, кратное 90 см (для нежидких продуктов см. 9.1.2).

6.5 Пробирки (колбы или флаконы) вместимостью, достаточной для того, чтобы поместить и оставить сверху пространство, необходимое для перемешивания 10 см (или количества, кратного 10 см) пробы жидкого продукта или исходной суспензии, или дальнейших десятикратных разведений.

6.6 Пипетки мерные вместимостью 1 и 2 см, имеющие выпускное отверстие диаметром от 2 до 3 мм, закрытые ватой.

6.7 Градуированные пипетки вместимостью от 10 до 20 см, закрытые ватой.

6.8 рН-метр с погрешностью измерения ±0,1 рН.

6.9 Весы аналитические с точностью взвешивания до 0,01 г.

Примечание - Допускается использовать другое оборудование с такими же или более высокими метрологическими характеристиками. Стеклянная посуда должна быть пригодной к повторной стерилизации и быть химически инертной.

7 Отбор проб

7.1 Отбор проб - по ГОСТ 13496.0 .

8 Подготовка испытуемых проб

8.1 Подготовка испытуемых проб - по ГОСТ Р 51419 .

9 Порядок проведения разведений

9.1 Испытуемая проба и исходная суспензия (первичное разведение)

Методику, описанную в 9.1.1, используют в следующих случаях:

- для невязких жидких продуктов (вода, молоко и т.д.), в которых распределение микроорганизмов гомогенное или легко делается гомогенным механическим путем (встряхивание и т.д.);

- для жидкой части гетерогенной смеси, которая считается достаточно представительной для всей пробы (например, водная фаза животных или растительных жиров).

Для всех других продуктов используют методику, описанную в 9.1.2.

Чтобы избежать повреждения микроорганизмов в результате внезапных изменений температуры, температура разбавителя в течение всего испытания должна быть приблизительно такой же, как у испытуемой пробы.

9.1.1 Жидкие продукты (которые можно отбирать пипетками)

Встряхивают испытуемую пробу в руке, производя 25 движений вверх и вниз с амплитудой около 30 см за 7 с. Чтобы добиться равномерного распределения микроорганизмов, лучше использовать стандартное механическое устройство. Пипеткой отбирают 1 см исследуемой пробы и вносят его в 9 см разбавителя, избегая контакта пипетки с разбавителем.

Осторожно смешивают исследуемую порцию с разбавителем путем десятикратного втягивания другой пипеткой или в механическом смесителе в течение 5-10 с. Частоту вращения смесителя надо подбирать так, чтобы жидкость, которая образует воронку, не доходила до края сосуда на 2-3 см.

Примечание - Если известно, что для исследуемых продуктов скопления микроорганизмов более эффективно диспергируются механическим перемешиванием, чем пипеткой, и при этом получаются значительно отличающиеся результаты, то специальный стандарт, касающийся изучаемого продукта, должен рекомендовать только один из этих методов, в основном, с использованием механического перемешивания. Условия использования смесителя должны быть точно указаны.

9.1.2 Другие продукты

Взвешивают навеску испытуемой пробы массой (10±0,01) г или массой, кратной 10 г, в резервуаре вращательного встряхивателя или в пластиковой емкости стомахера вместимостью, достаточной для выполнения исследования и приготовления всех дальнейших разведений, требуемых специальным стандартом для исследуемого продукта.

Добавляют объем разбавителя, равный 9 см или кратный 9 см.

Вращательный встряхиватель используют в течение времени, достаточного для того, чтобы получить от 15000 до 20000 оборотов, но не более 2,5 мин.

Стомахер используют в течение 1-2 мин с учетом свойств продукта (см. примечание 2).

Дают осесть крупным частицам в течение 15 мин, затем переносят определенное количество с верхнего слоя суспензии в культуральную пробирку, колбу или флакон, используя большую пипетку. Если имеется слой жира, пробу отбирают из водного слоя. Это количество должно быть достаточным для выполнения всего исследования и приготовления дальнейших разведений. Если дня инокуляции или дальнейшего разведения из исходной суспензии необходимо отобрать только одну порцию, то этот перенос можно не делать.

Примечания

1 Для некоторых продуктов (например, для продуктов с острыми частицами или с компонентами, которые трудно измельчить) стомахер не пригоден. Его следует использовать только тогда, когда имеются доказательства (опубликованные данные или сравнительные тесты), что полученные результаты несущественно отличаются от результатов, полученных с использованием вращательного встряхивателя.

2 Следует учитывать тот факт, что для некоторых продуктов, в частности зерновых, данная выше продолжительность встряхивания не подходит для таких микроорганизмов, как дрожжи и плесень.

3 В этом случае стомахер дает более высокие выходы, чем вращательный встряхиватель. Стомахер следует использовать в течение 10 мин и избегать разделения, так как некоторые дрожжи и плесени могут теряться из надосадочной жидкости.

9.2 Дальнейшие десятикратные разведения

В случае исследования на наличие или отсутствие микроорганизмов в 0,1 см или 0,1 г продукта готовят следующие разведения.

Переносят чистой пипеткой (если смесь исходной суспензии была получена пипеткой, используют ту же пипетку) 1 см исходной суспензии (первичное 1+9 (10) разведение в другую пробирку, содержащую 9 см стерильного разбавителя, избегая контакта пипетки с разбавителем.

Тщательно перемешивают или путем десятикратного втягивания чистой пипеткой, или в механическом смесителе в течение 5-10 с, чтобы получить разведение 10. Частоту вращения смесителя подбирают так, чтобы жидкость во время образования воронки не доходила до краев сосуда на 2-3 см.

При необходимости повторяют эти операции, используя разведение 10 или дальнейшие разведения, чтобы получить разведения 10, 10 и т.д. до тех пор, пока не будет получено приемлемое число микроорганизмов.

9.3 Повторение отдельных процедур

Процедуры, описанные в 9.1 и 9.2, проводят такое число раз, которое установлено специальным стандартом для конкретного продукта.

Примечание - Статистически установлено, что для того, чтобы снизить разброс результатов при использовании метода подсчета колоний, следует повторить процедуры с различными порциями испытуемой пробы, а не удваивать число чашек, заселенных из каждой пробирки одной серии разведений.

9.4 Длительность процедуры

Обычно разведения готовят из испытуемой пробы непосредственно перед анализом; длительность процедуры приготовления разведений и использования их для инокуляции культуральной среды должна быть не более 30 мин.

Примечание - Для некоторых продуктов при приготовлении исходной суспензии необходимо соблюдать меры предосторожности, установленные специальным стандартом для конкретного продукта, например:

- использовать для получения суспензии повышенные температуры;

- регулировать рН пробы;

- восстанавливать обезвоженные продукты и оживлять микроорганизмы, поврежденные во время различных обработок и хранения продукта.

ПРИЛОЖЕНИЕ А (справочное). Библиография

ПРИЛОЖЕНИЕ А
(справочное)

ИСО 6497 Корма для животных. Методы отбора проб


ОКС 65.120 С19 ОКСТУ 9209, 9709

Ключевые слова: разведение, разбавитель, стерилизация, исходная суспензия, десятичные разведения, культуральная среда, инокуляция
__________________________________________________________________________________



Электронный текст документа
подготовлен АО "Кодекс" и сверен по:
официальное издание
Комбикорма. Часть 8. Корма животного и
растительного происхождения.
Методы анализа: Сб. ГОСТов. -
М.: ИПК Издательство стандартов, 2002

Эпифитная микрофлора. Микрофлору, находящуюся на поверхности растений, называют эпифитной (поверхностной). Как правило, эта травяная палочка Bact.herbicola, занимающая около 40 % всей эпифитной микрофлоры, молочнокислые стрептококки и палочки, сенная и картофельная бациллы, флюоресцирующие бактерии, протей, сарцины, актиномицеты, плесени, дрожжи и др.

Эпифитная микрофлора представлена главным образом безвредными сапрофитами, однако при скашивании растений они могут интенсивно размножаться, вызывая гнилостные и бродильные процессы, приводящие к порче и разложению корма. Для предотвращения этих процессов растительные корма консервируют. Наиболее эффективным способом консервирования скошенной травы, зерна и других кормов является сушка. Сено сушат в прокосах, валках, копнах, на вешалах с помощью принудительной вентиляции атмосферным или подогретым воздухом. При этом, однако, следует иметь в виду, что пересушивание зеленой массы приводит к потере питательных веществ, особенно протеина и каротина. При увлажнении высушенного корма в нем вновь возникают микробиологические процессы, приводящие к повышению температуры, т. е. происходит термогенез (самонагревание) за счет деятельности вначале мезофильной, а затем термофильной микрофлоры. При умеренном развитии самонагревания солома, например, становится самопрелой и лучше поедается скотом. Явление микробного термогенеза в районах с влажным климатом используют для приготовления так называемого бурого сена.

Силосование (заквашивание) кормов. Это лучший способ консервирования зеленого корма, при котором растительную массу укладывают в силосные ямы, траншеи, башни и другие сооружения. Для понимания сущности процессов, происходящих при силосовании, необходимо детально знать биохимию и микробиологию его.

Существует два способа силосования: холодный и горячий. При холодном способе, имеющем наибольшее распространение, в созревающем силосе происходит умеренное повышение температуры — до 25— 30 °С. Растительная масса в этом случае укладывается в траншею одномоментно, утрамбовывается и изолируется слоем земли.

При горячем способе силосная траншея заполняется по частям, без утрамбовки, с перерывами в 1—2 дня. При таком силосовании обеспечивается аэробиоз, более интенсивно идут микробиологические и ферментативные процессы, в результате которых температура корма повышается до 45—50 °С. Затем укладывают второй слой толщиной до 1,5 м, третий, и так до полного заполнения траншеи. Горячий способ силосования применяется реже, поскольку разогревание растительной массы приводит к потере питательных веществ. Его целесообразно использовать для силосования грубо-стебельчатых кормов из малоценных трав, а также соломы.

В процессе созревания зеленой массы при холодном силосовании различают три последовательные фазы:

первая фаза (развития смешанной микрофлоры) связана с бурным размножением эпифитной микрофлоры, кишечной палочки, псевдомонаса, дрожжей, молочнокислых и гнилостных бактерий. Длительность первой фазы — 1—3 дня. В это время силос разогревается и подкисляется, создаются анаэробные условия, в результате чего большая часть смешанной микрофлоры погибает;

вторая фаза характеризуется вначале бурным размножением молочнокислых стрептококков, а затем молочнокислых палочек, продуцирующих молочную кислоту, которая подавляет размножение гнилостных и маслянокислых микроорганизмов, кроме споро-образующих. Длительность второй фазы от 2 нед до 3 мес;

третья фаза (конечная) связана с постепенным отмиранием в созревающем силосе возбудителей молочнокислого брожения (Sir. lactis, Str. plantarum, Str.thermophilus), концентрация молочной кислоты достигает 60 % и более, рН силосной массы снижается до 4,2—4,5. Кроме молочной кислоты в силосе накапливаются уксусная и даже масляная кислоты. Концентрация уксусной кислоты не должна превышать 40—60 % всех органических кислот, масляной кислоты должно быть не более 0,2 %.

При несоблюдении технологии приготовления силоса и его хранения он может заплесневеть, прогоркнуть и перекиснуть. Для профилактики пороков силоса микробного происхождения используют бактериальные закваски молочнокислых бактерий (Lactobacillus plantarum, Str. lactis diastaticus), пропионово-кислых и других бактерий. Кроме того, используют буферные кислотные смеси, содержащие разные минеральные кислоты, а также препараты, содержащие формиат кальция, метабисульфит, пиросульфит натрия, сульфаминовую, бензойную, муравьиную кислоты и другие вещества.

Дрожжевание кормов. Для обогащения кормов белком и витаминами используют кормовые или пивные дрожжи. Дрожжевание производят заквасочным или опарным методом. (Технология их дана в специальной литературе.)

Сенаж. Изложенные выше сведения относятся к консервированию кормов, имеющих нормальную влажность (около 75 %). Если влажность консервируемой массы значительно ниже (50— 65 %), то происходит хорошая ферментация даже при дефиците углеводов и получается корм высокого качества — сенаж. При этом рН корма может быть довольно высоким — около 5, так как гнилостные бактерии обладают меньшим осмотическим давлением, чем молочнокислые. При подсушивании корма в нем приостанавливаются гнилостные процессы, но продолжают действовать возбудители молочнокислого брожения. На этом основано приготовление сенажа, когда несколько подсушенную массу закладывают для консервирования, как при холодном силосовании.

Исследованиями авторов было показано, что в клевере, влажность которого составляла 50 % и ниже, развиваются микробиологические процессы. Они протекают тем слабее, чем суше корм. Доминирующей микрофлорой в консервируемом корме очень быстро становятся молочнокислые бактерии. Эта группа довольно специфичных микроорганизмов близка к Lactobacillus plantarum, но отличается способностью расти в условиях значительно более сухой среды и сбраживать крахмал. Их развитие в корме приводит к накоплению в нем некоторого количества молочной и уксусной кислот.

По типу сенажирования хорошо сохраняются предназначенные на корм измельченные початки кукурузы с влажностью 26—50 % (оптимум 30—40 %). В последнее время рекомендуют обрабатывать недосушенное сено (влажностью около 35 %) жидким аммиаком, который действует как консервант. При введении аммиака в корме создается щелочная реакция, блокирующая микробиологические и ферментативные процессы. Обработанный аммиаком корм должен быть покрыт каким-либо изоляционным материалом (Е. Н. Мишустин, В. Т. Емцев, 1987).

Главная > Учебно-методическое пособие

Занятие № 11

Тема : Микробиологическое исследование кормов. Цель занятия: Обучить методам исследования грубых и сочных кормов. Материалы и оборудование : предметные стекла, покровные стекла, препаровальные иглы, посев силоса (10 -6 , 10 -7 разведения) в МПБ, суспензия силоса, индикаторные бумажки для определения рН, посев силоса (10 -6 разведение) на МПА, увлажненные солома и зерно, посев зерна и соломы методом аппликации на МПА. Демонстрация : 1. Рост Cl.perfingens на среде ВильсонБлера; 2. Рост грибков на плотных средах; 3. Рост гнилостных бактерий в МПБ; 4. ИФА для выявления токсина ботулизма. Вопросы для обсуждения : 1. Что такое эпифитная микрофлора и какое ее значение? 2. Почему высушенное сено можно долго хранить? 3. Механизм губительного действия высушивания на микробы. 4. Что лежит в основе силосования корма? Методы силосования сочных кормов. 5. Микроорганизмы, способствующие хорошему качеству силосования. 6. Фазы созревания силосной массы. 7. Методы определения качества силоса.

I . Введение

Грубые корма разнообразны в ботаническом отношении и неоднородны в физическом состоянии. Каждый из них имеет свою технологию и способ хранения, при нарушении которых нередко происходит их порча. Так, например, при увлажнении корма создаются благоприятные условия для размножения гнилостной микрофлоры, плесневых грибов, актиномицетов, которые, развиваясь на растении, используют углеводы, белки, витамины и т.д. и тем самым снижают питательную ценность корма. Кроме того, ряд микроорганизмов могут в процессе своей жизнедеятельности выделять целый ряд токсических продуктов, вызывающих отравление животных. Всесторонний качественный и количественный анализ кормов довольно затруднен, так как не существует универсальной среды, на которой можно вырастить все встречающиеся виды микроорганизмов. Чаще всего при анализе грубых кормов определяют: 1) санитарную пригодность корма и его общую обсемененность; 2) наличие споровой микрофлоры, способной вызвать заболевания животных (сибирской язвой, эмфизематозным карбункулом, ботулизмом и др.); 3) микрофлору, вызывающую порчу кормов в процессе их хранения; 4) эпифитную микрофлору, играющую большую роль в процессе силосования (гнилостную, молочнокислую, маслянокислую и др.).

II . Микологическое исследование грубых кормов

Среди микрофлоры, вызывающей порчу грубых кормов, видное место занимают грибы. Известно, что корма, пораженные грибками, могут вызывать микозы и микотоксикозы. Первые возникают при попадании в организм и развитии самого грибка, вторые  на почве отравления токсинами (ядовитыми продуктами) грибков, развивающихся на кормах. Поэтому исследование пораженных грибами кормов ведут в двух направлениях: 1) обнаружение и выделение грибковвозбудителей болезней; 2) определение их токсичности. Наиболее токсичные свойства обнаружены у многих видов Aspergillus и Fusarium, встречающихся на соломе и мякине злаков, в почве и различных продуктах. При микологическом исследовании грубых кормов используют препарат “раздавленная капля” или выделяют чистую культуру грибков. Для этого в чашки Петри помещают два кружка фильтровальной бумаги (между которыми кладут тонкий слой ваты), завертывают их и стерилизуют в сушильном шкафу. Перед посевом кружки фильтровальной бумаги увлажняют питательной средой (Чапека или ВанИнтерсена) и раскладывают на них исследуемый корм. Ровные отрезки соломки (1.52 см) располагают по радиусу на расстоянии 12 см друг от друга. Культивирование производят в термостате при температуре 2426 о С в течение 1012 дней. При появлении вокруг соломинок черных, сажистых колоний производят микроскопирование и отсев на косой агар (суслоагар, плотную среду Чапека) для получения чистой культуры. При определении видового состава обращают внимание на строение органов спороношения.

III . Определение токсичности грибков

Для испытания токсичности выделенных культур грибков их размножают на доброкачественной соломе, увлажненной жидкой средой (Чапека или ВанИнтерсена) и простерилизованной в автоклаве при 120 о С в течение 3040 минут. Культивирование грибка производят при 2025 о С в течение 23 недель. Затем культуру убивают текучим паром (в течение часа), соломинки высушивают при 4045 о С и извлекают токсин. Экстрагирование токсина производят этиловым эфиром (в течение 6 часов). Вытяжку сгущают и наносят на свежевыбритый участок кожи кролику (ставят дермонекротическую пробу). В качестве контроля на другой участок выбритой кожи наносят вытяжку, полученную из доброкачественной саломы. Если выделенный гриб образует токсин, то вытяжка из него на 34-е сутки вызовет воспалительную реакцию: отечность, покраснение и омертвление ткани. На месте нанесения контрольной вытяжки изменений на коже не произойдет. Токсин (Аг?) можно определить реакцией преципитации с сыворотками. Элементарным условием сохранения кормов от заплеснения является обеспечение их сухого состояния. Эта задача решается своевременной уборкой кормов, правильным скирдованием и повседневной борьбой с повышением влажности во время хранения.

IV . Исследование кормов на ботулизм

У лошадей и других животных иногда возникают массовые заболевания, связанные с отравлением их токсином ботулизма. Материалом для исследования в этих случаях могут быть остатки несъеденного корма или содержимое желудка падших животных. Внешне этот корм ничем не отличается от доброкачественного, и выделить культуру возбудителя из него не всегда удается. Поэтому прибегают к постановке биологической пробы на морских свинках или выявляют токсин серологическими реакциями. 1. Присланные пробы корма растирают в ступке с постепенным добавлением физраствора (1:2) и оставляют при комнатной температуре на 12 часа. 2. Полученную взвесь фильтруют через бумажный фильтр и центрифугируют. 3. 12 мл полученной жидкости с помощью шприца спаивают двум морским свинкам. При наличии токсина ботулинуса морские свинки погибают в течение 35 суток при явлениях параличей мышц брюшной стенки и задних конечностей. 4. С фильтратом ставят реакции преципитации и ИФА. 5. Из осадка делают посев в две колбы с бульоном КиттТароцци под маслом (предварительно прокипяченным) и быстро охлаждают.

После посева одну из колб прогревают при 80 о С в течение 20 минут (для уничтожения неспоровых бактерий) и культивируют в термостате при 37 о С в течение 47 дней. При появлении в колбе роста из содержимого делают мазки, окрашивают их по Граму и просматривают с иммерсией. Палочка ботулинуса плектридиальной формы, грамположительная, чистую культуру ее получают в анаэробных условиях на кровяном агаре. Токсичность культуры проверяют на белых мышах, морских свинках или реакциями преципитации и ИФА.

V. Микробиологическое исследование силоса

Силос является одной из главных составных частей кормового рациона сельскохозяйственных животных, поэтому его качественному приготовлению уделяется большое внимание. В основе созревания силоса лежат микробиологические процессы. Одни из этих процессов (как, например, молочнокислое брожение) являются причиной созревания и консервирования силоса, тогда как другие (маслянокислое брожение, гниение) вызывают порчу корма. Оценка качества силоса производится по органолептическим, химическим и микробиологическим показателям. Для контроля за ходом силосования пробы рекомендуется брать в три срока:

в момент закладки силосуемой массы (на количественный и качественный состав эпифитной микрофлоры); после созревания силоса (на 1030-й день после закладки);

3) в момент вскрытия силосного сооружения. В связи с тем, что в разных слоях силосной массы создаются неодинаковые условия для развития микрофлоры, из крупных силосных сооружений (башни, ямы или траншеи) берут не менее трех проб по вертикали: из верхней, центральной и нижней частей.Из подозрительных участков стога или из кормушек забирают остатки корма (100200 г), упаковывают их в два-три слоя чистой бумаги, этикетируют и направляют в лабораторию. Исследование грубых кормов начинают с определения его ботанического состава, затем описывают органолептические свойства (цвет корма, наличие налетов, расположение налетов и их окраску и т.д.) и только потом проводят полный бактериологический анализ. Растительные корма богаты разнообразной бактериальной и грибковой микрофлорой (количество бактерий в 1 г различных растений доходит до 100000 клеток). Однако высокая обсемененность корма сама по себе без учета качественного состава микрофлоры не решает вопроса о его непригодности для вскармливания. Так, например, большая обсемененность травы и свежего сена псевдомонадами или молочнокислыми кокками и палочками является хорошим показателем, Тогда как высокая обсемененность корма бактериями группы E.coli или анаэробными бациллами Cl.perfingens ввиду их потенциальной патогенности является неблагоприятным санитарным показателем.

Органолептическая оценка силоса

При органолептическом исследовании обращают внимание на физические свойства силоса: структуру, цвет, запах и вкус силосующейся массы. Хороший силос отличается сохранением структур стеблей и листьев. Цвет их под влиянием органических кислот несколько изменяется до желто-оливкового. На воздухе силос быстро темнеет, поэтому определение цвета его следует производить сразу после взятия пробы из силосной массы. Если корм приобрел очень темный цвет, почти черный и стал бесструктурным, это указывает на процессы гниения; такой корм – недоброкачественный.Запах доброкачественного силоса приятный, напоминающий запах свежего ржаного хлеба, квашеной капусты, соленых огурцов или моченых яблок, иногда слегка спиртовой. Последний обуславливается развитием молочно-кислых бактерий и дрожжей. Резко кислый запах указывает на большое содержание уксусной кислоты, что свидетельствует о более низком качестве силоса. Затхлый и гнилостный запах указывает на обильное развитие в силосе плесеней и гнилостных бактерий, вызывающих порчу корма. Неприятный запах придает силосу масляная кислота, образующаяся в результате неправильно проведенного силосования и указывающая на недоброкачественность силоса.

Определение кислотности силоса

Наиболее ярким показателем микробиологических процессов, протекающих в силосе, является его рН. Определение производится ионометром или колометрическим методом по Михаэльсу.Для этой цели из силоса готовят вытяжку или путем настаивания в течение суток одной части силоса с 45 частями дистиллированной воды (для прекращения брожения обычно добавляют толуол), или эту навеску силоса (20 г) предварительно растирают в фарфоровой ступке, переносят в колбочку, а затем заливают дистиллированной водой (80 мл). Силос с водой энергично взбалтывают (в первом случае 45 раз, во втором – в течение 5 минут), фильтруют через бумажный фильтр и прозрачный фильтрат сразу используют для определения рН.В доброкачественном силосе рН должно быть не выше 4.04.2.

Микробиологическое исследование силоса

Для общего ознакомления с микрофлорой силоса производят его микроскопическое исследование. Для этой цели небольшое количество силоса (12 г) тщательно растирают в стерильной ступке с 12 мл стерильной воды и из полученной массы делают обычным способом мазок. Мазок сушат, фиксируют на пламени спиртовки и окрашивают водным раствором какого-нибудь анилинового красителя. Лучше всего окрашивать мазки из силоса карболовым эритрозином (5%-ный раствор карболовой кислоты  100 мл, сухого эритрозина  2 г); окраска производится в течение 2030 минут. Обычно в мазках, приготовленных из доброкачественного силоса, обнаруживается большое количество палочек, стрептококки, дрожжи. Наличие в препарате плесневых грибков указывает на порчу силоса. Для характеристики качества силоса производят определение общего числа микроорганизмов и их групповой учет. При этом прежде всего готовят разведение силоса (5 г) и переносят его в колбу со 100 мл стерильной воды. Силос с водой энергично взбалтывают в течение 10 минут и из полученного исходного разведения 1:10 готовят последующие разведения. Для приготовления разведения берут 67 пробирок, в которые предварительно наливают по 9 мл стерильной воды. Затем в первую из них пипеткой вносят 1 мл разведения силоса 1:10 (из колбы), тщательно взбалтывают в течение 35 минут и 1 мл полученного разведения 1:100 переносят в следующую пробирку и т.д. Таким образом готовят последующие разведения до 10 -6  10 -7 .

Определение в силосе общего количества бактерий

Для этого посев суспензии производят на МПА, в двухкратной повторности. Если силос находится в стадии брожения, для посева берут разведения 10 -6  10 -7 , при исследовании старого силоса 10 -6  10 -5 и даже меньше. Посев производят следующим образом: стерильной градуированной пипеткой асептично берут 1 мл соответствующего разведения (для каждого разведения нужна отдельная пипетка) и вносят в пустую чашку Петри. Затем в чашку наливают предварительно расплавленный и охлажденный до 50 о С мясо-пептонный агар.

Учет молочнокислых бактерий

Производят путем посева 34 разведений силосной массы на сусло-агаре с мелом (сусло-агар готовят из пива, разведенного водой 1:1 с добавлением 1.52%-ного агар-агара). Посевы выдерживают 34 дня в термостате при температуре 3035 о С. Вследствие образования кислоты и растворения мела колонии молочнокислых микробов образуют на твердых средах с мелом зоны просветления.

Определение количества маслянокислых бактерий

Производят путем посева 34 разведений силоса на картофельную среду Рушмана или на среду Е. Н. Мишустина следующего состава: крахмал  0.5 г; пептон  5.0 г; K 2 HPO 4  1.0 г; мел  5.0 г; водопроводная вода  1000 мл. Среда разливается по пробиркам с поплавками и стерилизуется в автоклаве при 1 атмосфере 20 минут. Различные разведения силосной массы (от 1:100 до 1:10 000) засевают в пробирки с питательной средой в количестве 1 мл (каждое разведение засевают параллельно в 23 пробирки). Часть из них после посева прогревают при температуре 80 о С в течение 1015 минут, а затем засеянные пробирки выдерживают в термостате при температуре 3540 о С до 10 суток. В процессе роста маслянокислых бактерий отмечают газообразование, гидролиз, растворение мела и запах прогорклого масла.

Определение гнилостных бактерий

Выполняют с помощью посевов 34 разведений силоса на МПБ, при этом между пробиркой и пробкой вставляют полоску фильтровальной бумаги, смоченную 10%-ным раствором уксуснокислого свинца, и красную лакмусовую бумажку. Гнилостные бактерии вызывают помутнение среды и образование H 2 S, которую определяют по почернению индикаторной бумажки, смоченной уксуснокислым свинцом, или посинению лакмусовой бумажки при выделении аммиака.

Определение количества дрожжей и плесени

Производят путем посева силоса на сусло-агар без добавления мела. Посев производят, как описано выше, из разведений силоса 1:1000  1:10000. Засеянные чашки Петри выращивают при температуре 2025 о С и подсчет выросших колоний производят через 4 суток. Для пересчета всех данных рекомендуется пользоваться таблицами МакКреди. Оценка результатов микробиологического исследования силоса Твердых микробиологических норм, характеризующих качество силоса, не имеется, и результаты микробиологического исследования дают лишь общее представление о ходе процессов в силосе. Показателями нормально протекающего процесса созревания силоса являются: низкое рН (4), преобладание молочнокислых бактерий (110 млн.), небольшое количество плесеней (до 4 тыс.), бактерий группы кишечной палочки (2500 млн.) и маслянокислых бацилл (250 млн.). Зрелый силос, в котором правильно протекали микробные процессы, беден микроорганизмами, в то же время силос богат органическими и минеральными веществами, которые находятся в легкоусвояемой форме. Все это делает силос ценным пищевым продуктом для сельскохозяйственных животных. Ход работы : I. Определить титр Cl.perfingens на среде ВильсонБлера:

Взвесить 0.1 г измельченного корма, поместить в колбу с 10 мл стерильного физиологического раствора и тщательно взболтать в течение 5 минут; Затем 1мл полученной суспензии внести в стерильную чашку Петри и залить питательной средой ВильсонБлера (100 мл 3%-ного МПА и 1%-ной глюкозы); растапливают в водяной бане и добавляют 10 мл 20%-ного раствора сульфита натрия и 1 мл 8%-ного хлористого натрия. Оба раствора готовят на стерильной дистиллированной воде и кипятят; Через сутки инкубирования в анаэростате при 37 градусах чашки Петри просматривают и отмечают результаты:

 отсутствие колоний  чистый корм;  13 колонии  слабозагрязненный корм;  310 колоний  умеренно загрязненный корм;  более 10 колоний  сильнозагрязненный корм; II. Приготовить препарат "раздавленная капля" из мицелия грибков на агаре и из увлажненного грубого корма (зерна, соломы):

Пораженное растение тщательно осмотреть и установить наличие или отсутствие спороношения; Выявленные на поверхности пораженной ткани спороношения в виде налета подушечек или плодовых тел снять препаровальной иглой и перенести на предметное стекло в каплю 50%-ного раствора глицерина или молочной кислоты;

Налет расправить иглами, накрыть покровным стеклом и изучить с сухими системами микроскопа (8´15 и 40´7); Промикроскопировать, изучить морфологию грибков, зарисовать.

III. Приготовить препарат из колоний, выросших вокруг зерен, соломы, разложенных на МПА. Окрасить по Граму, промикроскопировать, зарисовать. IV.Ознакомиться с общей микрофлорой силоса. Из суспензии силоса приготовить препарат, окрасить метиленовой синькой. Промикроскопировать,зарисовать. VI. Определить с помощью индикаторной бумажки рН силоса; VII.Определить общее число бактерий в 1 г силоса. Для этого подсчитать число колоний на МПА и умножить на степень разведения. VIII. Определить по росту на МПБ наличие в силосе гнилостных бактерий. IX. Учесть реакцию ИФА для выявления токсина ботулизма. X. Результаты исследований занести в протокол. Тесты для проверки знаний: 1. К органолептическим свойствам силоса относят: а) структуру, б) влажность, в) рН, г) цвет, д) запах. Ответ: а, г, д 2. При микробиологическом исследовании силоса определяют: а) ОМЧ, б) БГКП, в) споровые бактерии, г) маслянокислые, д) молочнокислые, е) Гр(+) Ответ: а, б, г, д Ключевые слова : эпифитная микрофлора, микрофлора корма, силос, маслянокислое брожение, гниение, молочнокислое брожение.

Занятие № 12

Тема : Микробиологическое исследование молока и молочнокислых продуктов. Цель занятия: Обучить методам исследования молока и молочнокислых продуктов. Материалы и оборудование : Стерильная посуда (пипетки, микропипетки, чашки Петри, пробирки, скальпель), набор красителей, предметные стекла, 1%-ный водный раствор метиленовой синьки, жидкость Никифорова, МПА (высокие столбики), стерильная водопроводная вода по 9 мл в пробирках и по 20 мл, молоко, кисломолочные продукты (сметана, кефир или кефирные зерна). Демонстрация : 1. Опыт в пробирках для определения редуктазы в молоке. 2. Опыт в чашках Петри для определения лизоцима в молоке. 3. Чашки с ростом для определения микробного числа молока. 4. Стерильные среды Эндо, Козера, Кесслера с глюкозой. 5. Среды с ростом БГКП Кесслера, Эндо, Козера и среда с глюкозой. Вопросы для обсуждения : 1. Источники микрофлоры молока. 2. Смена фаз при хранении молока. 3. Молоко как возможный источник патогенных микробов. 4. Порок молока, микробы – участники. 5. Какие вам известны способы консервирования молока? 6. Методы микробиологического исследования молока. 7. Как взять пробу молока для бактериологического исследования? 8. Какими требованиями должно отвечать молоко группы А? 9. Какие вы знаете кисломолочные продукты? 10. Какие микроорганизмы участвуют в молочнокислом брожении? 12. Микробиология маслоделия, сыроделия. 13. Какие вы знаете пороки микробного происхождения, связанные с хра- нением масла и сыра?

I . Введение

Молоко является продуктом питания и средой для развития микроорганизмов. Качество молока определяется рядом показателей  физических, химических и бактериологических. Физические и химические показатели характеризуют питательную ценность молока, а бактериологические позволяют судить о свежести молока и степени его загрязнения. При помощи этих показателей можно контролировать санитарные требования при дойке, обработке, хранении и транспортировке молока. Некоторые бактериологические показатели (наряду с физическими и химическими) характеризуют состояние вымени животного, т. е. наличие или отсутствие в нем воспалительного процесса. Микрофлора молока складывается из ряда источников: 1) микрофлора вымени; 2) внешние источники заражения молока (кожа животного, посуда и аппаратура, вода, корм, подстилка, воздух, тело и одежда доярки) как источники первичной микрофлоры молока. Вторичная микрофлора молока  это накопление микрофлоры в молоке путем размножения ранее попавших в него микроорганизмов.

II . Взятие материала для исследования молока

В зависимости от поставленных задач исследования пробы молока берут от одной определенной коровы или от группы коров. При взятии пробы молока от одной коровы: 1) готовят стерильную посуду; 2) вымя коровы тщательно моют теплой водой с мылом, протирают стерильным полотенцем, соски дезинфицируют ватным тампоном, смоченным спиртом; 3) доильщицы тщательно моют и дезинфицируют руки; 4) из каждого соска поочередно молоко сдаивают в стерильную посуду: а) первые 34 струйки (при исследовании это микрофлора кожи животного), в пищу они не идут и не уничтожаются; б) средние струйки (микрофлора молока); в) последние струйки (микрофлора вымени). При исследовании последних струек молока и наличии в них лейкоцитов и микроорганизмов можно выявить мастит (воспаление молочной железы). Все пробы этикетируются и направляются на исследование в лабораторию.При взятии молока от группы коров: 1) молоко во флягах тщательно перемешивают мутовкой медленными круговыми движениями; 2) забор проб молока производят стерильным пробником (длинная стеклянная трубка) в количестве 50 мл и сливают в стерильный флакон. Флакон закрывают над пламенем спиртовки ватной пробкой. Нумеруют, на этикеткеуказывают дату взятия пробы (число и час), а также фамилию, имя, отчество и должность лица, производившего взятие пробы. Исследование взятых проб молока производят сразу или не позднее 2-х часов с момента взятия проб. Если молоко не может быть немедленно исследовано, то его охлаждают до + 46 о С, хранят и транспортируют при этой же температуре.Основными бактериологическими показателями, характеризующими свежесть молока и его чистоту, являются: а) количество бактерий в 1 мл молока (микробное число), б) коли-титр молока (наименьший объем молока, в котором обнаружена одна БГКП). Микробное число молока можно определить: 1) бактериологическим способом (высев определенного объема молока на специальные среды с последующим подсчетом выросших колоний; 2) методом прямого подсчета бактерий под микроскопом (метод Брида, Королева, Разумовой и т.д.); 3) косвенными методами : а) с помощью пробы на редуктазу; б) с помощью пробы с резазурином.

1. Микробиологическое исследование

молочнокислых продуктов

Типичные молочнокислые бактерии неподвижны, Гр (+), слабо или совсем не растут на МП-ых средах. Молочнокислые бактерии молока при сбраживании углеводов образуют в основном молочную кислоту, побочные продукты обычно мало заметны. Но встречаются молочнокислые бактерии, которые при брожении наряду с молочной кислотой образуют значительное количество летучих кислот (уксусной, углекислоты), спирт, диацетил и при развитии совместно с активными молочнокислыми бактериями придают молочным продуктам своеобразный специфический вкус и аромат. Молочнокислые микроорганизмы представлены тремя группами: молочнокислые стрептококки, молочнокислые палочки, дрожжи. Ход работы: I. Определить количество бактерий в 1 мл молока (методом посева):

Приготовить серийное разведение молока: а) взять 4 пробирки с 9 мл водопроводной воды и подписать: № 1, 2, 3, 4; б) взятую пробу молока тщательно взболтать и стерильной пипеткой набрать из нее 1 мл молока и внести в пробирку № 1, тщательно перемешать, соблюдая все правила асептики, и перенести в пробирку № 2 и т.д. Вы получите разведения молока: № 1 (1:10), № 2 (1:100), № 3 (1:1000), № 4 (1:10000).

Взять 1 стерильную чашку Петри, подписать "молоко 1:10000". В чашку внести 1 мл из пробирки № 4, залить чашку расплавленным и охлажденным до 4550 о С МПА (15 мл). Образовавшуюся смесь тщательно перемешать путем вращения чашки и оставить на столе до полного застывания агара.

Чашку перевернуть вверх дном и поставить в термостат на 48 часов.

По демонстрационным чашкам подсчитать микробное число.

II. Провести микроскопическое исследование кисломолочных продуктов:

Приготовить мазок из сметаны, высушить на воздухе, зафиксировать в жидкости Никифорова и окрасить метиленовой синькой (3 мин). Мазок промыть, подсушить фильтровальной бумагой. Промикроскопировать с иммерсионной системой. Отметить наличие молочнокислых стрептококков, палочек и дрожжей, сбраживающих лактозу. Приготовить мазок из кефира: а) зерно кефира поместить между двумя стерильными стеклами и раздавить его; б) полученные на стекле отпечатки высушить, зафиксировать и окрасить метиленовой синькой, промикроскопировать, зарисовать и отметить наличие единичных дрожжей, молочнокислых стрептококков, молочнокислых бактерий и палочки стромы.

Тесты для проверки знаний: 1. Молоко 1 класса имеет следующие характеристики: а) сине-стальную окраску, б) количество бактерий > 20 млн/мл, в) количество бактерий < 20 млн/мл, г) белую окраску, д) количество бактерий менее 500 тыс/мл. Ответ: а, д 2. В лаборатории имеется: 1) сырое цельное молоко, 2) пастеризованный обрат, 3) сыворотка молочная, а также закваски: а) молочный срептококк, б) ацидофильная палочка. Что необходимо использовать, чтобы приготовить ацидофилин для телят? Ответ: 1, 3 б Ключевые слова : ОМЧ молока, Coli-титр молока, молочнокислые бактерии, кисломолочные продукты

Занятие № 13

Тема : Препараты, используемые для лечения, профилактики и диагностики инфекционных заболеваний сельскохозяйственных животных. Цель занятия: Изучить вакцины, сыворотки, иммуноглобулины, аллергены и способы их применения. Материалы и оборудование: Набор препаратов лечебного, профилактического и диагностического назначения в животноводстве. Вопросы для обсуждения : 1. Вакцины, их назначение, виды вакцин. 2. Иммунные сыворотки, их назначение. 3. Способы получения лечебно-профилактических препаратов. 4. Иммуноглобулины, их назначение. 5. Аллергены, их получение и использование. 6. Диагностические сыворотки, их получение, применение. 7. Диагностикумы, их получение, применение. 8. Применение бактериофагов для лечения и диагностики.

I . Профилактические и лечебные препараты

Одним из важнейших направлений прикладной иммунологии является создание эффективных препаратов для иммунопрофилактики и иммунотерапии инфекционных заболеваний. Среди таких препаратов различают: 1. Вакцины и анатоксины. 2. Иммунные сыворотки и иммуноглобулины.

Вакцины

Вакцины  препараты, используемые для активной иммунизации людей и животных. Э.Дженнером была получена первая вакцина, содержащая вирус коровьей оспы (vacca - корова). Название вакцины было дано Л. Пастером всем прививочным препаратам, полученным из микроорганизмов и их продуктов. Вакцины должны обладать определенными свойствами (физико-химическими, антигенными) и при правильном дозировании и введении животным давать соответствующую реакцию и создавать активный иммунитет против той или иной болезни.Различают вакцины живые, убитые, субъединичные, генно-инженерные и другие. Живые вакцины изготовляют из специально полученных штаммов микроорганизмов с ослабленной вирулентностью и полноценными иммуногенными свойствами. Для этого вначале прибегают к селекции и направленному изменению бактериальных культур и вирусов (на фоне сохраненной антигенной структуры). Это достигается: выращиванием возбудителя в средах, недостаточно для его развития благоприятных (туберкулезная вакцина в БЦЖ); пассажами через организм маловосприимчивых животных (вакцина против рожи свиней, вакцина против бешенства, вакцина против вируса чумы свиней и вируса Ньюкастловской болезни); обработкой химическими веществами и физическими агентами (вакцины против пастереллеза птиц, против сибирской язвы (СТИ, ГНТИ), вакцины Ценковского, бруцеллеза ВА-19, против паратифа телят Т с -177). Живые вакцины обычно более эффективны, создают, как правило, напряженный иммунитет, сходный с постинфекционным. В большинстве случаев достаточно бывает однократной вакцинации живой вакцины, так как вакцинный штамм может размножаться и персистировать в организме.Однако после их применения могут возникнуть поствакцинальные осложнения, особенно у животных с пониженной резистентностью к заболеваниям. Вакцины чаще леофильно высушивают: из замороженного состояния, в вакууме. Убитые вакцины представляют собой взвесь убитых (инактивированных) микроорганизмов. Их готовят из штаммов микроорганизмов, обладающих максимально выраженными иммуногенными свойствами. Для инактивации вакцин используют разные методы: нагревание, УФ-лучи, ультразвук, химические вещества (спирт, формалин, фенол и другие). Инактивацию проводят в условиях, исключающих денатаруцию антигенов. Примерами убитых вакцин могут служить: формолвакцина против эмфизематозного карбункула, формолвакцина против оспы свиней и против паратифа телят. Вакцины, содержащие убитые микробы, безопасны, вызывают медленное образование иммунитета и менее эффективны в условиях действующего очага инфекции. Следует учитывать, что аттенуированный (ослабленный) или убитый возбудитель  это множество различных антигенных детерминант, из которых протективностью, т.е. способностью индуцировать защитный иммунитет, обладают очень немногие. В связи с этим целесообразно усовершенствовать вакцины путем использования компонентов бактериальной клетки и вирионов, обладающих наиболее выраженным протективным действием. Вакцины, содержащие отдельные антигенные комплексы микробных клеток и вирионов, называют субъединичными . При введении их в организм субъединичные вакцины благодаря хорошей растворимости и относительно низкой молекулярной массе быстро метаболируются и выводятся из организма, не обеспечивая длительного иммуногенного раздражения. Поэтому к ним обычно добавляют вещества-адъюванты (adjuvans - помогающий): гидроокись аммония, алюмо-калиевые квасцы, фосфаты аммония, кальция и другие. Адъюванты укрупняют антигенные частицы, созюдают в месте введения депо (депонированные вакцины), т.е. удлиняют период иммуногенного раздражения. Кроме того, адъюванты усиливают фагоцитоз, митоз иммунокомпетентных клеток. Генно-инженерные вакцины получают поэтапно. Сначала составляют генетическую карту генома данного возбудителя. Затем гены, контролирующие протективные антигены, переносят в геном других микроорганизмов, например в дрожжевую клетку или кишечную палочку, клонируют в них, добиваясь экспрессии этих генов в новых условиях. Синтезируемые новыми клетками антигены (белки) очищают от балластных веществ и адсорбируют на адъювантах. Созданы генно-инженерные вакцины против ящура, бешенства. Ассоциированные вакцины . Большое значение в животноводстве имеет ассоциированная иммунизация, т.е. введение в организм ассоциированных вакцин, содержащих одновременно антигены нескольких возбудителей, например: ассоциированная вакцина против эмфизематозного карбункула, злокачественного отека и пастереллеза крупного рогатого скота, ассоциированная вакцина против ботулизма и пастереллеза норок.

Анатоксины

Анатоксины используют для создания искусственного активного антитоксического иммунитета (столбняк, ботулизм и другие). Анатоксин представляет собой экзотоксин (фильтрат бульонной культуры токсигенного микроба), обезвреженный длительным (1830 дней) воздействием формалина при температуре 3740 о С. Анатоксин контролируют на стерильность, безвредность и иммуногенность. Анатоксины очищают от балластных белков и адсорбируют на адъювантах.

Иммунные сыворотки и иммуноглобулины

При многих бактериальных и вирусных инфекциях антитела играют защитную роль, нейтрализуя токсины и внеклеточные вирусы, способствуют очищению организма от возбудителя. Однако накопление достаточного количества антител наблюдается, как правило, не ранее чем через 23 недели после начала заболевания. Поэтому для создания искусственного пассивного иммунитета используют введение животным иммунных сывороток или иммуноглобулинов.Сыворотки применяют с профилактическими и лечебными целями. Для профилактики их используют, когда имеется непосредственная опасность заражения, например, столбняком, анаэробными инфекциями при ранении. Сыворотку вводят чаще внутримышечно или внутривенно. Иммунные сыворотки получают путем многократной иммунизации лошадей, от которых можно получить сравнительно много крови. Животных иммунизируют соответствующими антигенами: анатоксинами для получения антитоксических сывороток и вакцинами для получения антибактериальных и антивирусных сывороток. После окончания иммунизации у животного стерильно берут кровь, из которой получают сыворотку. Сыворотку проверяют на активность (титр антител), стерильность, безвредность, очищают от балластных белков. Чаще для этого применяют метод ферментативного гидролиза, осаждение активных фракций сульфатом аммония и диализ  «Диаферм» . Из сывороток получают иммуноглобулины путем спиртоводного осаждения при низкой температуре. Из крови гипериммунизированных животных получают иммуноглобулины против бешенства, сибирской язвы, чумы, лептоспироза и т.д.

II . Диагностические препараты

Диагностические препараты используются для: 1) определения с помощью специальных иммунных сывороток вида и типа микроорганизма, выделенного от больного животного; 2) обнаружения антител в сыворотке больного животного;

выявления аллергической перестройки организма, возникающей при некоторых инфекционных заболеваниях.

Диагностические сыворотки

Диагностические сыворотки содержат специфические антитела, с их помощью можно выделить антигены соответствующего возбудителя. Диагностические сыворотки подразделяются на агглютинирующие, преципитирующие, нейтрализующие, люминисцентные, меченые (конъюгированные) ферментом и другие.

Все диагностические иммунные сыворотки готовят путем иммунизации животных (кроликов, лошадей) соответствующим антигеном. Полученные от иммунизированных животных сыворотки титруют (определяют титр соответствующих антител), в стерильных условиях разливают в ампулы. Свободные аминогруппы F c фрагментов антител в иммунных сыворотках можно конъюгировать ферментами, флюоресцентными красителями, изотопами. Эти сыворотки используют для диагностики в реакциях ммунофлюоресцентного и иммуноферментного анализа, радиоиммунного анализа.

Диагностикумы

Диагностикумы используют для определения специфических антител в сыворотке животного. Чаще всего диагностикумы представляют собой гомогенную взвесь убитых микробов или вирусов. Диагностикумы из большинства бактерий готовятся путем инактивации их взвеси формалином, этиловым спиртом, прогреванием и другими методами.В ряде случаев для серодиагностики применяют не целые микроорганизмы, а выделенные из микробных тел антигены. Это достигается различными методами: дезинтеграцией химическими веществами, кипячением, ультразвуком и т.д.

Бактериофаги

Бактериофаги характеризуются высокой специфичностью, поэтому их можно использовать для: 1) фаготерапии  лечения некоторых инфекционных заболеваний; 2) фагопрофилактики  предупреждения некоторых заболеваний; 3) диагностики.

Аллергены

Аллергены  это препараты, которые применяют с целью диагностики соответствующего заболевания, для выявления иммунологической перестройки организма в результате вакцинации или заболевания. Основные требования к аллергенам  высокая чувствительность и специфичность.Микробные аллергены чаще готовят из фильтратов бульонных культур. Вводят накожно, внутрикожно или на конъюктиву глаза. При положительной реакции на месте введения аллергена развивается местная воспалительная реакция: отечность, гиперемия, выделение гноя из внутреннего угла глаза и др. Ход работы: I. Изучить вакцины: а) живые вакцины  БЦЖ, СТИ, б) убитые вакцины, в) субъединичные вакцины. II. Изучить анатоксины: столбнячный, ботулинический. III. Изучить иммунные сыворотки и иммуноглобулины. Просмотреть образцы следующих сывороток: а) сыворотку против сибирской язвы, б) сыворотку против паратифа поросят,в) поливалентную сыворотку против лептоспироза. IV.Изучить аллергены. Просмотреть образцы следующих аллергенов: а) альтуберкулин Коха, б) туберкулин ППД, в) бруцеллизат ВИЭМ, г) бруцеллин ВИЭМ. Разобрать способы введения. V. Изучить диагностические сыворотки: а) агглютинирующую сальмонелезную поливалентную, б) агглютинирующую сальмонелезную групповую О-сыворотку, в) агглютинирующую сальмонелезную типовую Н-сыворотку, г) люминесцирующую сыворотку чумную, д) люминесцирующую сыворотку бруцеллезную, е)преципитирующую сибиреязвенную сыворотку. Просмотреть образцы сывороток, разобрать способы их приготовления, применения. VI. Изучить диагностикумы: а) сальмонелезный ОН-диагностикум, б) бруцеллезный диагностикум, в) эритроцитарный сибиреязвенный диагностикум, г) бруцеллезный эритроцитарный диагностикум. Просмотреть образцы диагностикумов, разобрать способы их получения, применения. VII. Изучить бактериофаги: а) для лечения: стафилококковый, стрептококковый, б) для диагностики: чумной диагностический фаг. Тесты для проверки знаний: 1. Туберкулины для аллергодиагностики животному вводят: а) внутрикожно, б) внутривенно, в) внутримышечно, г) на конъюктиву. Ответ: а, г 2. Для активной иммунизации против сибирской язвы животным вводят: а) противосибиреязвенную сыворотку, б) вакцину СТИ, в) вакцину ГНТИ, г) противосибиреязвенный иммуноглобулин, д) вакцины Ценковского. Ответ: б, в, д 3. Живые вакцины: а) содержат иммуноглобулины, б) создают пассивный иммунитет организма, в) создают активный иммунитет, г) состоят из аттенуированного штамма. Ответ: в, г Ключевые слова : вакцины, иммунные сыворотки, иммуноглобулины, аллергены, диагностикумы, бактериофаги.

ЛИТЕРАТУРА

Вирусные инфекции. Труды института имени Пастера. С.-Пб.: НИИ эпидемиологии и микробиологии, 1992. 122 с. Кочемасова З.Н. и др. Санитарная микробиология и вирусология. М.: Медицина, 1987. 440 с. Красильников А.П. Микробиологический словарь-справочник. Минск: Беларусь, 1986. 210 с. Краткий определитель бактерий. Под ред. Дж. Хоулта. М.: Мир, 1980. 312 с. Лукомская К.А. Микробиология с основами макробиологии. М.: Мир, 1987. 120 с. Покровский В.Н. Бактериофаг – вирус бактерий. М.: Знание, 1986. 310 с. Пяткин К. Д. Микробиология. М.: Медицина, 1971. 352 с.

Стейниер Р., Эдельберг Э., Дж. Ингрэм. Мир микробов. Т.1, 2, 3. М.: Мир, 1979. 270 с.

ПРЕДИСЛОВИЕ ………………………………………………………………. 3 Раздел I. МОРФОЛОГИЯ МИКРООРГАНИЗМОВ 1. Правила работы в бактериологической лаборатории. Техника приготовления и простая окраска препаратов. Морфология микроорганизмов ……………………………………………. 4

Структура бактериальной клетки. Сложные методы окраски ………….. 7

Раздел II. ФИЗИОЛОГИЯ МИКРООРГАНИЗМОВ 3. Питательные среды. Выделение чистых культур бактерий (I этап) …………………………………………………..………. 13 4. Ферменты бактерий. Выделение чистых культур бактерий (II и III этапы). Определение чувствительности микроорганизмов к антибиотикам, УФО и химическим веществам. Культивирование анаэробов …………………………………. 18 5. Выделение чистых культур (IV этап). Влияние факторов внешней среды на микроорганизмы. Понятие о стерилизации и дезинфекции ………………………………………………………………. 23 6. Генетика микроорганизмов ………………………………………………… 28 Раздел III. САНИТАРНОБАКТЕРИОЛОГИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ ОКРУЖАЮЩЕЙ СРЕДЫ 7. Санитарнобактериологическое изучение природных биоценозов …………………………………………………………………… 31 Раздел IV. ИНФЕКЦИЯ И ИММУНИТЕТ 8. Реакции иммунитета ………………………………………………………... 38 9. Методы лабораторной диагностики инфекционных болезней сельскохозяйственных животных, вызываемых бактериями ……………. 45 10. Лабораторная диагностика вирусных инфекций ………………………….. 50 Раздел V. МИКРОФЛОРА КОРМОВ, МОЛОКА И МОЛОЧНОКИСЛЫХ ПРОДУКТОВ 11. Микробиологическое исследование кормов ………………………………. 53 12. Микробиологическое исследование молока и молочнокислых продуктов …………………………………………………. 62 13. Препараты, используемые для лечения, профилактики и диагностики инфекционных заболеваний сельскохозяйственных животных ………………………………………….. 66 Литература ……………………………………………………………………….. 73

Предисловие (66)

Документ

ПРЕДИСЛОВИЕ Центральный государственный архив научно-технической документации Казахской ССР (ЦГА НТД КазССР) Главного архивного управления при Совете Министров Каз ССР образован постановлением Совета Министров Казахской ССР от 7 февраля

Предисловие (73)

Рассказ

Предисловие Основой рассказов являются подлинные события. Начинаются они разделом "Дороги старокрымских партизан к победе". В нем читатель познакомится не только с геройскими делами партизан, но и убедится, что в годы Великой

Корма определяют состояние и продуктивность животных. По происхождению различают растительные, животные и минеральные корма. Растительные корма занимают наибольший удельный вес. В зависимости от содержания влаги в заготовленных растительных кормах различают: сено (12-17%), сенаж (40-50%), силос (70-80%).

Эпифитная микрофлора. Микробиологические процессы, происходящие при силосовании кормов

Микроорганизмы, которые живут и размножаются на наземных частях растений, называют эпифитными. Изучение видового состава микробов, необходимо, чтобы знать какие процессы они могут вызвать при заготовке и хранении кормов. Количество микробов на растениях зависит от фазы развития растения, влажности, температуры и др.факторов. при увлажнении численность микроорганизмов возрастает. Чем старше растение, тем больше микробов. На поверхности листьев растений содержится большое количество аммонификаторов и меньше других - молочнокислых, маслянокислых, дрожжей, эшерихий.

Для эпифитов характерно то, что они, находясь на поверхности растений, хорошо переносят действие фитонцидов, солнечных лучей и питаются веществами, выделяемыми растениями. Устойчивость эпифитов к фитонцидам гораздо выше, чем у почвенных микробов. Вместе с тем рост микробов на поверхности растений ограничен, так как они выделяют незначительное количество питательных веществ. Эпифиты не повреждают и не проникают в ткани здорового растения. Велика роль в этом естественного иммунитета и цидных веществ. (растения выделяют фитонциды)

При изучении эпифитной микрофлоры строгой специфичности к определенным растениям не выявлено.

После скашивания растений, микробы начинают активно размножаться так как исчезают преграды, препятствующие проникновению микробов в их ткани. Происходит потеря питательных веществ и порча корма. Он приобретает гнилостный, затхлый запах, изменяет окраску. Растения легко разрываются, их консистенция становится мажущейся. Такой корм плохо поедается животными и представляет опасность для их здоровья.